Veolia Water Technologies & Solutions

Plataforma de testeo de endotoxinas bacterianas (BET) Sievers Eclipse

Tecnología innovadora de BET que asegura automatización y cumplimiento

La innovadora plataforma de detección automática de endotoxinas Sievers Eclipse reduce el tiempo de preparación del ensayo en hasta 85 %, y reduce el uso del reactivos lisado de amebocitos de Limulus (LAL) en hasta en 90 %, mientras cumple con todos los requisitos de la farmacopea armonizada: USP <85>, EP 2.6.14 y JP 4.01. Mediante una revolucionaria tecnología, la solución de pruebas de endotoxinas Eclipse disminuye significativamente los pasos para usar los tubos de ensayo, reduce la variabilidad de operador a operador y simplifica la preparación de las pruebas BET. La plataforma Eclipse utiliza un manejo preciso de líquidos microfluídicos y endotoxina incrustada para automatizar los ensayos cinéticos cromogénicos. La producción de 21 muestras por placa se mantiene sin la complejidad de la robótica o el tiempo y la técnica que requiere una prueba LAL tradicional.

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Equipos y servicios para pruebas de endotoxinas bacterianas consistentes y conscientes que cumplen con las normas

En Veolia, optamos por simplificar las mediciones complejas.

Durante años, las pruebas de endotoxinas han requerido técnicos muy capacitados para preparar cuidadosamente las muestras y los estándares para los ensayos basados en coágulos de gel y placas de 96 pocillos. Estos enfoques analíticos son lentos en cuanto a su preparación, propensos a errores y repetición de pruebas, y no cumplen con las últimas pautas de integridad de datos. Si bien estos métodos se benefician con la sensibilidad y especificidad del lisado de amebocitos de Limulus (LAL) para la detección de endotoxinas, existe el deseo de disminuir el uso de reactivos LAL. Esto se debe a que el LAL se crea a partir de la sangre de los cangrejos herradura, y todos queremos conservar y optimizar todo lo posible el uso de este recurso.

Ahora, hay una manera más fácil de lograr pruebas de endotoxinas que cumplan con la normativa y mejorar la sostenibilidad con un nuevo ensayo farmacopeico de endotoxinas que utiliza microfluidos. Este ensayo simplifica la preparación de las pruebas, reduce las tasas de repetición, cumple totalmente con las últimas pautas de integridad de datos y reduce el uso del LAL hasta en un 90 %.

Sistema de pruebas de endotoxinas Sievers Eclipse

Características y beneficios

A pesar de la necesidad de contar con soluciones más fáciles, automatizadas y sostenibles para las pruebas de endotoxinas, muchas plataformas no cumplen con los requisitos clave ni simplifican la instalación ni la validación para facilitar su adopción. Con Sievers Eclipse, obtiene los beneficios de facilidad de preparación del ensayo de endotoxinas bacterianas y cumplimiento total, sin la complejidad de la robótica ni la dificultad de la implementación.

La Plataforma BET Sievers Eclipse y el software empresarial ofrecen:

  • Preparación de 9 minutos para un ensayo de 21 muestras (con un ahorro de tiempo de hasta un 85 %).
  • Reducción del uso del reactivo LAL en hasta un 90 %.
  • Cumplimiento de todos los requisitos de la farmacopea armonizada: USP <85>, EP 2.6.14 y JP 4.01.
  • Software altamente personalizable que cumple totalmente con 21 CFR Parte 11 y ALCOA.+

 

Requisitos de prueba Plataforma BET Sievers Eclipse
Requisitos de USP <85>, EP 2.6.14 y JP 4.01 ✔️
Muestras y controles de productos positivos (PPC) por duplicado, como mínimo ✔️
Curva estándar de al menos 3 puntos por duplicado, como mínimo, usando endotoxina estandarizada (RSE/CSE) ✔️
Controles negativos por duplicado, como mínimo ✔️
Certificación de lote de lisado y analista por triplicado, como mínimo ✔️
Uso de LAL con licencia de la FDA ✔️
Cumplimiento de 21 CFR Parte 11 y de las pautas de integridad de datos ✔️

 

¿Necesita asistencia en el proceso? Así es como el equipo de Sievers Eclipse brinda apoyo durante el proceso de implementación:

  • Paquete de soporte de validación (VSP) IQ/OQ/PQ para validar el sistema de forma integral, con la instalación y la validación finalizadas en cuestión de días.
  • Elaboración de un informe completo de validación de la plataforma por parte de nuestro equipo.
  • Protocolo de software específico que contribuye a la validación del producto.
  • Lo ayudamos a cambiar los métodos (por ejemplo: cinético turbidimétrico → cinético cromogénico).
  • Ofrecemos un protocolo de estudio puente para ayudar a conectar su plataforma cinética cromogénica actual con la plataforma Eclipse.
  • Nuestro protocolo de comparabilidad realiza una comparación entre la plataforma automatizada Sievers y la plataforma de placas de 96 pocillos.

 

Detalles del sistema

Detalles del sistema


Método BET

Cinético cromogénico

Modo de detección

Absorbancia

Rango

0.005–50 EU/mL

Precisión

≤ Tiempo de inicio de 15% CV

Exactitud

50-200% de la real

Tipo de muestra

Acuosa, inyectada por tubo de ensayo

Calibración

Hasta 12 meses

Tiempo de análisis

Hasta 2 horas

Temperatura de la muestra

37 ± 1 °C

Temperatura ambiente

17–30 °C

Capacidad

Hasta 21 muestras en duplicado con controles de productos positivos

Control de temperatura

37 ± 0.5 °C

Fuente de luz

Emisor LED

Detección de fallas fluídicas

Emisor de 1450 nm

Precisión óptica

≤ Diferencia de 5% del valor esperado

Linealidad óptica

Valor R ≥ 0.980

Filtro óptico de longitud de onda

405 nm

Intervalo de lectura

5 segundos

Especificaciones del analizador


Salidas

Digital por USB

Pantalla

OLED

Requisito de energía

100-240 voltios AC a 50/60 Hz

Fusibles

Fusible T 8 A 250 VAC, tamaño 5 x 20 mm SOLO Littelfuse 218008 o Cooper Bussmann S506-8-R.

Dimensiones

Al.: 17.5 cm (6.9 in); An.: 35.1 cm (13.8 in); Prof.: 50.3 cm (19.8 in)

Peso

10 kg (22.1 lb)

Certificaciones de seguridad

UL 61010-1:2012Ed.3+R:20abril2016 CSA C22.2N°61010-2-020

CSA C22.2N°61010-1-12:2012Ed.3+U1;U2 IEC 61010-1:2010 Ed.3+C1;C2

UL 61010-2-010:2015Ed.3                             IEC 61010-2-010:2003Ed.2

UL 61010-2-020:2016Ed.3                             IEC 61010-2-020:2016Ed.3

CSA C22.2#61010-2-010:2015Ed.3


Humedad relativa máxima

85 % sin condensación

Altitud máxima

3,000 m (9,800 pies)

Grado de contaminación
2

 

Opciones y accesorios

  • Analizador: analizador de absorbancia con control de incubación uniforme a 37 °C, tecnología centrífuga y transmisión segura de datos.

  • Microplaca: dispositivo de manejo preciso de líquidos que logra la automatización mediante una tecnología microfluídica innovadora con estándares de endotoxinas incrustadas y PPC.

  • Software: solución para empresas sumamente personalizable que cumple con 21 CFR Parte 11 y las pautas de integridad de datos de ALCOA+.

La microplaca Eclipse, junto con el analizador y el software Eclipse, usan fuerza centrífuga y cámaras neumáticas para medir y distribuir uniformemente cantidades precisas de agua de reactivos LAL, muestras y LAL a través de 104 pozos ópticos Los pozos ópticos constan de segmentos para curvas estándar, muestras y controles de productos positivos (PPC). La reacción se controla a 37 +/-1 °C, y se logra una vista de alta definición de cada pozo al obtener una lectura de 405 nm cada cinco segundos.

Recursos

Preguntas frecuentes sobre las pruebas de detección de endotoxinas bacterianas

¿En qué consisten las pruebas de detección de endotoxinas bacterianas?

Las pruebas de endotoxinas bacterianas son un procedimiento de control de calidad fundamental que se utiliza en las industrias farmacéutica, de dispositivos médicos y biotecnología para detectar y cuantificar la presencia de endotoxinas en diversos productos. Las endotoxinas son componentes de la membrana celular externa de las bacterias gramnegativas y pueden causar respuestas inmunitarias graves en humanos y animales, incluso en pequeñas cantidades.

¿Qué son las endotoxinas bacterianas?

Las endotoxinas bacterianas se encuentran en la membrana externa de la pared celular de las bacterias gramnegativas. El efecto de las endotoxinas de las bacterias gramnegativas se debe principalmente al lípido A, un componente de los lipopolisacáridos (LPS), que puede ejercer respuestas pirógenas (que inducen fiebre) que pueden ser peligrosas e incluso fatales cuando se encuentran en el torrente sanguíneo y otros fluidos corporales por encima de ciertas concentraciones. Como algunos productos farmacéuticos y dispositivos médicos ingresan en el torrente sanguíneo, en esas industrias son obligatorias las pruebas de detección de endotoxinas. Por su fuerte toxicidad y su efecto en la seguridad de los pacientes, las endotoxinas son reguladas en todo el mundo por la FDA de EE.UU. y la farmacopea internacional en el caso de cualquier producto de las biociencias que vaya a estar en contacto con sangre humana y/o animal.

¿Por qué es necesario hacer pruebas de detección de endotoxinas bacterianas en el agua o los productos finales?

En el sector farmacéutico y el de los equipos médicos, así como otras industrias de las ciencias biológicas, las pruebas de detección de endotoxinas son cruciales para el control de calidad y la seguridad del paciente. Las pruebas de detección de endotoxinas se realizan en sistemas de agua de uso farmacéutico, incluida el agua para inyección (WFI) que se utiliza como agua como ingrediente, y productos terminados como fármacos, fármacos veterinarios y productos biológicos y para dispositivos médicos. Los productos médicos y farmacéuticos testeados incluyen los productos farmacéuticos para uso parenteral (administrados a través de inyección por vía intravenosa, subcutánea, intramuscular e intradérmica) y los dispositivos médicos que tienen contacto directo o indirecto con la sangre, el sistema cardiovascular, el sistema linfático o el líquido cefalorraquídeo. Las farmacopeas internacionales (USP <85>, EP 2.6.14 y JP 4.01) describen las normas para el testeo de endotoxinas bacterianas (BET, según su sigla en inglés) y los límites de endotoxinas. Las directrices de la FDA incluyen recomendaciones para fabricantes de productos biológicos, fármacos y equipos médicos basadas en los conceptos vigentes sobre las recomendaciones para los testeos y los criterios de aceptación cubiertos en los procedimientos farmacopeicos.

¿Cómo es el método para detectar endotoxinas bacterianas?

Durante casi 40 años, la FDA de EE. UU. ha aceptado la prueba mediante lisado de amebocitos de Limulus (LAL) para la detección de endotoxinas en productos terminados. Este ensayo in vitro, que se usa en lugar de la prueba de pirógenos en conejos, permite detectar la presencia y la concentración de endotoxinas bacterianas. En las pruebas de LAL, el lisado de la sangre de cangrejos herradura (Limulus polyphemus) reacciona con las endotoxinas bacterianas y así confirma su presencia en una muestra. Hay tres métodos principales para los testeos de endotoxinas bacterianas con LAL: turbidimétrico, cromogénico y de gelificación. En el método de gelificación, se mezclan el LAL y la muestra, y el operador busca detectar la formación de gel o coágulos en el tubo de reacción. Los resultados se obtienen a partir de la interpretación subjetiva de la formación del coágulo, por lo cual el método de gelificación es una prueba cualitativa. En los métodos turbidimétrico y cromogénico, las muestras se mezclan con el reactivo LAL y se van midiendo el cambio de color y la turbidez en diferentes momentos. Los métodos cromogénico y turbidimétrico para los ensayos LAL son cuantitativos y muestran la cantidad de endotoxinas presente. Los resultados se calculan tomando como referencia una curva de calibración. Los límites y requisitos de endotoxinas para la realización de BET se describen en la farmacopea global, USP <85>, EP 2.6.14 y JP 4.01. Un capítulo general nuevo de la Farmacopea Europea describe un método para BET en el que se usa el factor C recombinante (rFC) en vez del clásico método basado en LAL.

¿Qué cantidad de reactivo de lisado de amebocitos de Limulus (LAL) se usa con la plataforma para BET Sievers Eclipse?

Con apenas 1 mL del reactivo de LAL, en la plataforma Eclipse se pueden procesar 21 muestras. Al reducir hasta en un 90% el uso de lisado de cangrejo herradura (HSC, por sus siglas en inglés), Eclipse reduce la demanda de este valioso recurso natural y permite realizar un ensayo de endotoxinas bacterianas (BET) que cumple con todas las normas que la población global de HSC puede mantener.

¿La plataforma para BET Sievers Eclipse cumple con todas las normas?

Sí. La plataforma Eclipse utiliza LAL autorizado por la FDA disponible comercialmente y cumple con todos los requisitos de la farmacopea global armonizada, USP <85>, EP 2.6.14 y JP 4.01. Las pruebas de detección de endotoxinas bacterianas con la plataforma Eclipse incluyen una curva estándar de un mínimo de tres puntos por duplicado, utilizando endotoxina estandarizada; muestras y PPC por duplicado; controles negativos por duplicado; calificación de lote de lisado y analista por triplicado; uso de LAL con licencia de la FDA. Además, cumple con 21 CFR Parte 11 y las pautas de integridad de datos.

Con Sievers Eclipse, ¿las curvas estándar se automatizan?

Sí. Habitualmente, para que las pruebas de endotoxinas cumplan con las normas el usuario final debe armar una curva de calibración de al menos tres puntos por duplicado a partir de un vial base de endotoxina estandarizada; además, deben hacérseles controles negativos por duplicado y se debe procesar cada muestra por duplicado con PPC, también por duplicado. Con la plataforma para BET Sievers Eclipse, estos pasos se automatizan de acuerdo con estándares de endotoxinas precargados, que alcanzan una curva de calibración de hasta cinco puntos, y PPC también configurados previamente. Por lo tanto, lo único que debe hacer el usuario final es cargar el agua para BET y las muestras en la placa, sin necesidad de preparar nada más. Como resultado, se puede preparar el ensayo en solo 9 minutos, mientras que con las otras plataformas generalmente se tarda más de 60.

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