Colaboramos con Eli Lilly para presentar una investigación sobre reactivos recombinantes y tecnología microfluídica para pruebas de endotoxinas bacterianas (BET) en la Conferencia de Microbiología Farmacéutica de la Asociación de Medicamentos Parenterales (PDA).
Nuestros hallazgos, basados en datos de muestras del mundo real, demuestran la precisión y fiabilidad de los agentes recombinantes en las plataformas modernas de detección microbiológica. Jay Bolden y Hayden Skalski presentan su investigación en la PDA Microbiology Conference.
Antecedentes: Lisado de amebocitos de Limulus (LAL) vs. reactivos en cascada recombinantes (rCR) en ensayos BET microfluídicos
Las compañías farmacéuticas están adoptando cada vez más tecnologías innovadoras para cumplir con las expectativas regulatorias cambiantes y, al mismo tiempo, desarrollar operaciones más sostenibles. Las pruebas de endotoxinas son un excelente ejemplo de este cambio, ya que las presiones regulatorias y de sostenibilidad están transformando el panorama de BET. El Anexo 1 fomenta el avance tecnológico para optimizar los procesos de fabricación, y la reciente publicación de USP <86> sobre reactivos recombinantes para pruebas de endotoxinas representa una oportunidad clave para alcanzar tanto el cumplimiento normativo como los objetivos de sostenibilidad.
Por estos motivos, Veolia, en colaboración con Eli Lilly, realizó un estudio comparativo utilizando la plataforma de pruebas de endotoxinas bacterianas (BET) Sievers Eclipse para comparar los resultados entre el lisado de amebocitos de Limulus (LAL) tradicional y los reactivos en cascada recombinantes (rCR) más recientes. La plataforma utiliza microfluidos y fuerza centrípeta; permite la preparación del ensayo en el 85% del tiempo que se tarda en montar una microplaca tradicional de 96 pocillos; utiliza hasta un 90% menos de LAL o rCR; y automatiza la entrega del LAL a las muestras. Además de aumentar la eficiencia, garantiza resultados precisos y exactos, lo que permite a los fabricantes cumplir con el Anexo 1 y los objetivos de sostenibilidad sin dejar de cumplir plenamente con las regulaciones para garantizar la seguridad del paciente.
Esta investigación describe los resultados de las pruebas de endotoxinas con datos obtenidos de muestras del mundo real, proporcionando una comparación práctica entre los dos tipos de reactivos.
Estudio comparativo: Detección de endotoxinas naturales (NOE) y endotoxinas estándar de referencia (RSE)
El propósito de este estudio fue impulsado por dos objetivos. El objetivo principal fue evaluar la detección y recuperación tanto de endotoxinas de origen natural (NOE) como de agua purificada enriquecida con endotoxina estándar de referencia (RSE). Esta evaluación se llevó a cabo utilizando dos métodos de prueba diferentes: lisado de amebocitos de Limulus tradicional (LAL) y reactivo en cascada recombinante (rCR), con el objetivo de demostrar una recuperación confiable de endotoxinas en ambas plataformas de prueba.
En segundo lugar, estas capacidades se validaron en la plataforma BET Sievers Eclipse desafiándola con ambos tipos de reactivos. Esta validación fue particularmente significativa, ya que su objetivo era demostrar la idoneidad del sistema para las pruebas de muestras en el mundo real, al tiempo que ofrecía dos beneficios sustanciales: una reducción del 90 % en el consumo de reactivos y la opción de usar reactivos recombinantes, promoviendo así prácticas de prueba más sostenibles en la industria.
Muestras: estudio comparativo de rCR de 12 tipos de muestras
En el estudio de comparación entre el lisado de amebocitos de Limulus (LAL) y los reactivos recombinantes en cascada (rCR) se utilizaron las siguientes muestras:
- Dos anticuerpos monoclonales
- Insulina
- Péptido
- NOE (ver Figura 1)
- Histidina y acetato de sodio
- LRW (en inglés)
- Aguas purificadas
- Aguas purificadas con picos RSE
- Polisorbato 80
- Productos falsificados
- Componentes (tapón, cartucho)
- Yeastolate
Figura 1: Comparación de endotoxinas de origen natural (NOE)
Resultados: LAL vs rCR - Rendimiento y resultados de las pruebas
La siguiente figura detalla las tasas de recuperación de muestras y reactivos de control positivo de productos (PPC).
Conclusión: Rendimiento de rCR en plataformas microfluídicas
Este estudio mostró un rendimiento equivalente entre LAL y rCR utilizando Sievers Eclipse para la detección de endotoxinas bacterianas en muestras del mundo real, así como endotoxinas naturales. Con base en la evidencia, se puede determinar que la plataforma de prueba de endotoxinas bacterianas Sievers Eclipse puede utilizar con éxito reactivos en cascada recombinantes, siempre que se haya verificado la compatibilidad de la muestra.
La automatización a través de la plataforma de microfluidos centrípetos de Eclipse ofrece la forma más simple de microfluidos BET disponible, lo que proporciona un ahorro de tiempo significativo y reduce las posibilidades de error. Con la disponibilidad de esta tecnología innovadora, los ensayos BET se pueden optimizar sin dejar de cumplir plenamente con los compendios.
Los beneficios incluyen:
- Cumple con USP <85> y <86>
- Se ha demostrado que funciona con reactivos LAL y rCR
- Se necesita hasta un 90% menos de reactivo; Ayudas en iniciativas de sostenibilidad
- 27 pasos de pipeteo en total para 21 muestras para una mayor eficiencia
- Tecnología innovadora alineada con las directrices del Anexo 1
Más información sobre el Sievers Eclipse
Autores:
- Jay Bolden
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Jay Bolden es director sénior de la Organización Global de Control de Calidad Analítica de Eli Lilly and Company. Es un experto en la materia de endotoxinas bacterianas y dirige un equipo con supervisión de control de calidad global para endotoxinas, microbiología y métodos de prueba virológicos. Jay tiene una licenciatura en Biología y un certificado en Estudios Ambientales de la Universidad de Indiana y tiene más de 25 años de experiencia en la industria en desarrollo, microbiología de procesos y laboratorio, y liderazgo en laboratorios de microbiología. Jay es miembro del Comité de Expertos en Microbiología de la Farmacopea de los Estados Unidos y es autor de un capítulo de libro y de varios artículos revisados por pares sobre endotoxinas. Contenido Accordion 1.
- Meg Provenzano
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Meg Provenzano es la gerente global de productos de los instrumentos de biodetección Sievers de Veolia. Tiene más de 10 años de experiencia en el sector de las pruebas de detección de endotoxinas bacterianas y ha ocupado diversos puestos en las áreas de Control de calidad, Asistencia técnica y Gestión de productos. Antes de unirse a Veolia, Meg fue gerente de productos en Charles River Laboratories. Está enfocada en el cliente y disfruta de la resolución práctica de problemas, ya sea para cuestiones técnicas, asistencia para ensayos o software. Meg tiene una licenciatura en Ciencias del Mar y Biología de la Coastal Carolina University, donde se especializó en la investigación de la población de delfines mulares.
- Brian Short
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Brian Short es especialista en aplicaciones farmacéuticas globales en Veolia y brinda soporte estratégico para aplicaciones de carbono orgánico total y biodetección farmacéutica para la industria de las ciencias biológicas. Con 20 años de experiencia trabajando en y con laboratorios de control de calidad farmacéuticos, Brian ha supervisado y apoyado pruebas de alto volumen durante el proceso y productos terminados. Después de haber ocupado cargos anteriores en Wyeth y Lonza, y con nueve años de experiencia en el apoyo a la línea de productos Sievers como parte de GE Analytical Instruments, SUEZ y ahora Veolia, Brian tiene una amplia experiencia en instrumentos y software de detección de endotoxinas, incluida la instalación, la calificación y la capacitación. Brian tiene una licenciatura en Ciencias Biológicas de York College of Pennsylvania.
- Hayden Skalski
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Hayden Skalski es especialista en aplicación de productos para ciencias biológicas de Veolia y se especializa en pruebas de endotoxinas bacterianas (BET). Hayden tiene más de 10 años de experiencia en la industria farmacéutica y en microbiología de control de calidad, y ha realizado presentaciones sobre numerosos temas relacionados con las pruebas de endotoxinas. Anteriormente, Hayden ocupó cargos en Charles River Laboratories, Regeneron y Novartis, donde validó y ejecutó protocolos de desarrollo de métodos para pruebas de endotoxinas, brindó asistencia al cliente, resolvió problemas y brindó soporte para pruebas de productos de alto volumen. Hayden tiene una licenciatura en Biología de la Universidad de Albany (SUNY). Kelly Smith es bióloga principal sénior en la Organización Global de Control de Calidad Analítica de Eli Lilly and Company. Es experta en endotoxinas bacterianas con más de 25 años de experiencia en la industria y tiene una licenciatura en química de la Universidad de Butler.
- Kelly Smith
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Kelly Smith es bióloga principal sénior en la Organización Global de Control de Calidad Analítica de Eli Lilly and Company. Es experta en endotoxinas bacterianas con más de 25 años de experiencia en la industria y tiene una licenciatura en química de la Universidad de Butler.